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當(dāng)前位置：北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>產(chǎn)品>>培養(yǎng)基>> PRS-ICM-CRPRECEDO原代腸癌條件重編程培養(yǎng)基
產(chǎn)品名稱：PRECEDO原代腸癌條件重編程培養(yǎng)基(Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明：PRECEDO原代腸癌條件重編程培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進人源腸癌原代細胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基,。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),，含有必需和非必需的氨基酸、維生素,、有機和無機化合物,、激素、生長因子,、微量礦物質(zhì)和一定量的血清,。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO,。,、37℃培養(yǎng)箱中平衡時，pH值為7.4,。該培養(yǎng)基的配方可以理想人源腸癌原代細胞體外培養(yǎng)環(huán)境,，選擇性地促進體外人源腸癌原代細胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明：
?使用前準(zhǔn)備
(1) 15mL無菌離心管,、移液器,、移液管,、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min；提前30min從4 ℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫,。
(2)γ 射線照射過的NIH-3T3細胞（40 Gy輻照）,。
?腸癌原代上皮細胞培養(yǎng)
（1）獲取的人源腸癌原代細胞，按照表1中細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中,，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1和表2所示）,。
（2）原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁），培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液,，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數(shù)目的一半）,。
注：針對實體瘤樣本,，細胞粒徑大于12微米進行計數(shù);倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間,、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細胞數(shù)量;表格供參考,，具體實驗具體對待。
?腸癌原代上皮傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆,，且匯合度85~95%時即可傳代,。
（2）培養(yǎng)箱中取出細胞，棄舊培養(yǎng)液,，0.05%yimei洗滌5秒后吸盡,，再加入適量0.05%yimei，37℃孵育,，2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養(yǎng)基終止消化,，并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,，1500 rpm,3min。
（4）棄上清,，以1~5mL相對應(yīng)的原代細胞培養(yǎng)基重懸細胞,，活細胞計數(shù)，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,，加入γ射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積,、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1,、表2所示）,。
（5）補加腸癌培養(yǎng)基至所需體積，十字交叉混勻,，培養(yǎng)容器75%表面消毒后置培養(yǎng)箱,，37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。其他步驟同上,。
注意事項：
本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫,。
使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染,。
本產(chǎn)品中含有一定比例的血清和原代細胞專用抗生素,，如無特殊需要不用額外再添加血清和抗生素，可直接使用,。
樣本需為腫瘤組織,、內(nèi)鏡組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%）,，培養(yǎng)成功率越高,。
為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。
傳代消化時切記不要消化過度,，不宜超過5min，對細胞造成損傷,，影響細胞狀態(tài),。
請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期,，必須放棄使用,。
本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷,。
